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離子對試劑作用原理及使用
  • 更新日期:2017-02-07     信息來源:本站      瀏覽次數(shù):6425
    • 1、離子對試劑作用原理
        “加入離子對試劑后,它可以與待分析的物質(zhì)(多為在溶液狀態(tài)時顯以與離子對試劑相反的電荷)結(jié)合成離子對而呈中性,這樣非極性就表現(xiàn)出來,從而在色譜柱上有保留行為。”
         我覺得離子對試劑很像膠黏劑,一頭以離子吸引住待測物(也是離子),另一頭以碳鏈與固定性作用,從而把待測物保持在固定相上 。它的優(yōu)點和缺點,都是因為這樣的特性。
      2、試劑選擇
         “離子對分為正離子對和負(fù)離子對,分析酸性樣品(確切的說應(yīng)該是作用基團(tuán))用正離子對試劑,分析堿性樣品用負(fù)離子對試劑。
        正離子對試劑可以吸附帶負(fù)電荷的樣品組分,負(fù)離子對試劑反之。戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉……十二烷基磺酸鈉都屬于負(fù)離子對試劑;四丁基溴化銨、四丁基硫酸氫銨一類屬于正離子對試劑。
         離子對要考慮樣品體系的復(fù)雜性和干擾物的特性,先用原則一般盡可能使用碳鏈短的先,這樣可以避免強(qiáng)保留造成對柱子效能的影響,同時,濃度盡可能的低,以保證對柱子填料的穩(wěn)定性影響zui小及清洗方便。”
        看來做實驗下手輕點兒好,從碳鏈短的開始,從低濃度開始,不行再慢慢加。不過這次的使用經(jīng)驗是從碳鏈長度中等的開始,可以更快看到效果,節(jié)約摸索分析條件的時間。同時流動相PH值盡可能低以確保離子化程度。
       
      3、試劑的使用
        “離子對試劑不一定是表面活性劑,如己烷和庚烷磺酸鈉,又如三乙胺或四丁基溴化胺,不具表面活性作用。所以用己烷和庚烷鹽就沒有泡末,用四丁基溴化胺也不產(chǎn)生氣泡。十二烷基磺酸鈉(或硫酸鈉),或者十六烷基溴化鈉(CTAB,一種做陰離子用的陽性表面活性劑),在濃度高的時候容易產(chǎn)上泡末。做HPLC時流動相里加的SDS或CTAB濃度一般不會太高,一般在0.1%以下,而且流動相里有甲醇等有機(jī)溶劑,高濃度的有機(jī)溶劑有破乳的作用,因此,混合后的流動相泡末應(yīng)該不會很多。另外,做電泳加入的SDS量很大的比如做蛋白質(zhì)SDS膠,或者毛細(xì)管電泳里的MECC,SDS濃度很高,而且沒有或者有很少比例的有機(jī)改性劑,當(dāng)然會有氣泡,跟HPLC不*相同。”
      達(dá)人們的意思我看明白了,就是有點泡沫不要怕,確保溶液搖勻就好。
      使用離子對試劑時,調(diào)節(jié)保留時間的方式與普通反相不同,變化有機(jī)相比例沒有改變PH值來得有效。
           “當(dāng)流動相PH值較高時,樣品以中性形式存在,那么正電荷較少,相應(yīng)的保留較弱;當(dāng)流動相PH值較低時,樣品便以質(zhì)子堿H+形式的離子狀態(tài)存在,那么正電荷與固定相上帶負(fù)電荷的-SO3強(qiáng)烈吸附,相應(yīng)的保留會非常強(qiáng)。”
        “再說明一下B物質(zhì)的pKa,其值為10.5,在pH為4.5、3.8時都以離子態(tài)存在,這點沒錯,雖然都是離子態(tài),都是99%以上,但從量上說還是有點不一樣的。任何物質(zhì)以離子態(tài)存在時都有一個平衡的狀態(tài):B+(H+)==(BH+),這里存在著一個平衡常數(shù)K(或者說離解常數(shù)),于是pH不同時,H+不同,對應(yīng)的B、BH+也不同。所以才會出現(xiàn)pH不同,保留值會不同。
        另外我認(rèn)為4.5和3.8的pH相差不大,其改變對物質(zhì)的保留值影響不會很大,因為在流動相中還受到很多因素的影響。”

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